محمداصفهاني در تهران متولد شد او پیش از این که به خوانندگی روی بیاورد قاری قرآن بود و در مسابقات قرآن قبل از انقلاب در رده نوجوانان مقام کسب کرد. به خاطر کسب مقام در مسابقات قرآن قرار شد به کویت اعزام شود که این سفر به دلیل مخالفت مادرش لغو شد. در تهران مشغول تحصیل شد و سرانجام در سال ۱۳۷۶ هجری خورشیدی در رشته دکترای پزشکی (طب عمومی) فارغ التحصیل شد. در جوانی بواسطه دایی خود به محمدرضا شجریان معرفی شد و موسيقي ايـرانـي را با بهره‌مندي از مكتب محمدرضا شجـريان و شاگردش علي جهانـــدار آموخت و از آموزش‌های اساتيــدي چون همايون خـرم ، فريدون شهبازيان و بابك بيـات در زمينه تصنيف خوانـي و ترانـه و زيبايـي شناسي در موسيـقي ملي ايران بهره برد.

محمد اصفهانی تیتراژ سریال‌ها و فیلم‌هایی مانند "آوای فاخته"، "موسیقی متن سینمایی اخراجی‌ها" را اجرا کرده‌است و آلبوم‌های "تنهاترین سردار" در سال 1375، "گلچین"، "حسرت"، "فاصله"، "النور"، "تنها ماندم" و "ولایت عشق"، "ماه غریبستان"، "نون و دلقک"، "هفت سین"، "برکت"، "حضور۱"، "حضور۲ "، "بی واژه" و "شکوه" را در سال 1393 بازار عرضه کرده است.